مائع ڪروميٽوگرافي پاران مقدار جي تجزيي جا اصول ۽ طريقا

مائع ڪروميٽوگرافي جي الڳ ٿيڻ واري ميڪانيزم ٻن مرحلن لاء مرکب ۾ اجزاء جي لاڳاپي ۾ فرق تي ٻڌل آهي.

مختلف اسٽيشنري مرحلن جي مطابق، مائع ڪروميٽوگرافي کي ورهايو ويو آهي مائع-سالڊ ڪروميٽوگرافي، مائع- مائع ڪروميٽوگرافي ۽ بند ٿيل مرحلو ڪروميٽوگرافي.سڀ کان وڏي پيماني تي استعمال ٿيل آهن مائع-سولڊ ڪروميٽوگرافي سان سليڪا جيل فلر طور ۽ بانڊڊ فيز ڪروميٽوگرافي مائڪروسيليڪا سان ميٽرڪس جي طور تي.

اسٽيشنري مرحلي جي شڪل جي مطابق، مائع ڪروميٽوگرافي کي ڪالمن ڪروميٽوگرافي، پيپر ڪروميٽوگرافي ۽ پتلي پرت ڪروميٽوگرافي ۾ ورهائي سگھجي ٿو.adsorption گنجائش موجب، ان کي ورهائي سگهجي ٿو adsorption chromatography، ورهاڱي chromatography، آئن مٽا سٽا ڪروماتوگرافي ۽ gel permeation chromatography.

تازن سالن ۾، هڪ تيز پريشر مائع وهڪري جو نظام مائع ڪالمن ڪروميٽوگرافي سسٽم ۾ شامل ڪيو ويو آهي ته جيئن موبائيل مرحلي کي تيز دٻاءُ هيٺ تيزيءَ سان وهندو رهي ته جيئن علحدگيءَ جي اثر کي بهتر بڻائي سگهجي، تنهنڪري اعليٰ ڪارڪردگي (جنهن کي هاءِ پريشر پڻ چيو ويندو آهي) مائع ڪروميٽوگرافي. ظاهر ٿيو آهي.

حصو
01 مائع ڪروميٽوگرافي جي مقدار جي تجزيي جو اصول

معيار جي بنياد تي مقدار کي طئي ڪرڻ لاء، خالص مادي جي ضرورت آهي معيار جي طور تي؛

Liquid chromatography quantification هڪ نسبتا مقداري طريقو آهي: اهو آهي، مرکب ۾ تجزيي جي مقدار جو اندازو خالص معياري نموني جي ڄاڻايل مقدار مان لڳايو ويو آهي.

حصو
02 Liquid Chromatography ذريعي مقدار جي وضاحت لاءِ بنياد

ماپيل جزو جي مقدار (W) جوابي قدر (A) (چوٽي جي اوچائي يا چوٽي واري علائقي)، W = f × A.

مقدار جي اصلاح جو عنصر (f): اهو مقدار جي حساب ڪتاب جي فارمولا جو تناسب مسلسل آهي، ۽ ان جي جسماني معني ماپيل جزو جي مقدار آهي جيڪا يونٽ جي جوابي قدر (چوٽي واري علائقي) جي نمائندگي ڪئي وئي آهي.

مقدار جي اصلاح جو عنصر معياري نموني جي ڄاڻايل مقدار ۽ ان جي جوابي قدر مان حاصل ڪري سگھجي ٿو.

اڻڄاتل جزو جي جوابي قيمت کي ماپ ڪريو، ۽ جزو جي مقدار کي مقدار جي اصلاح واري عنصر ذريعي حاصل ڪري سگھجي ٿو.

حصو
03 مقداري تجزيي ۾ عام اصطلاح

نمونو (نمونہ): هڪ حل جنهن ۾ ڪروميٽوگرافڪ تجزيي لاءِ تجزيي شامل آهي.معياري ۽ اڻڄاتل نموني ۾ ورهايل.

معياري: هڪ خالص پيداوار هڪ سڃاتل ڪنسنٽريشن سان.اڻڄاتل نمونو (اڻ ڄاتو): اهو مرکب جنهن جي ڪنسنٽريشن کي جانچيو وڃي.

نموني وزن: نموني جو اصل وزن جانچيو وڃي.

Dilution: اڻڄاتل نموني جي گهٽتائي عنصر.

جزو: ڪروميٽوگرافڪ چوٽي جنهن کي مقداري طور تي تجزيو ڪيو وڃي، يعني اهو تجزيو ڪندڙ جنهن جو مواد اڻڄاتل هجي.

جزو جو مقدار (رقم): مواد جو مواد (يا ڪنسنٽريشن) جاچڻ لاءِ.

انٽيگريٽي: ڪمپيوٽر ذريعي ڪروميٽوگرافڪ چوٽي جي چوٽي واري علائقي کي ماپڻ جو ڪمپيوٽيشنل عمل.

Calibration وکر: جزوي مواد جو هڪ لڪير وکر بمقابله ردعمل قدر، معياري مواد جي ڄاڻايل مقدار مان قائم ڪيل، تجزيه جي اڻڄاتل مواد کي طئي ڪرڻ لاء استعمال ڪيو ويندو آهي.

حصو
04 مائع ڪروميٽوگرافي جو مقداري تجزيو

1. مقداري تجزيي لاءِ مناسب ڪروميٽوگرافڪ طريقو چونڊيو:

l معلوم ٿيل جزو جي چوٽي جي تصديق ڪريو ۽ 1.5 کان وڌيڪ قرارداد (R) حاصل ڪريو

l جانچيل اجزاء جي ڪروميٽوگرافڪ چوٽي جي مطابقت (پاڪيءَ) جو اندازو لڳايو

l معلوم ڪرڻ جي حد ۽ طريقي جي مقدار جي حد جو اندازو لڳايو؛حساسيت ۽ لڪير جي حد

2. مختلف ڪنسنٽريشن جي معياري نمونن سان گڏ هڪ calibration وکر قائم ڪريو

3. مقدار جي طريقن جي درستگي ۽ درستگي چيڪ ڪريو

4. نموني گڏ ڪرڻ، ڊيٽا پروسيسنگ ۽ رپورٽ جا نتيجا لاڳو ڪرڻ لاءِ لاڳاپيل ڪروميٽوگرافي مئنيجمينٽ سافٽ ويئر استعمال ڪريو

حصو
05 مقدار جي چوٽي جي سڃاڻپ (معياري)

هر ڪروميٽوگرافڪ چوٽي کي معيار جي لحاظ سان سڃاڻڻ لاءِ

پهريون، معياري نموني استعمال ڪريو رکاوٽ واري وقت (Rt) کي مقرر ڪرڻ لاءِ ڪروميٽوگرافڪ چوٽي جي مقدار کي طئي ڪرڻ لاءِ.برقرار رکڻ واري وقت جي ڀيٽ ڪندي، نامعلوم نموني ۾ هر ڪروميٽوگرافڪ چوٽي سان لاڳاپيل جزو ڳوليو.ڪروميٽوگرافڪ قابليت وارو طريقو اهو آهي ته برقرار رکڻ واري وقت کي معياري نموني سان ڀيٽيو وڃي.معيار ڪافي نه آهيوڌيڪ تصديق (معياري)

1. معياري اضافي جو طريقو

2. ساڳئي وقت ٻيا طريقا استعمال ڪريو: ٻيا ڪروميٽوگرافڪ طريقا (ميکانيزم کي تبديل ڪريو، جھڙوڪ: مختلف ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن کي استعمال ڪندي)، ٻيا ڊيڪٽر (PDA: اسپيڪٽرم موازنہ، اسپيڪٽرم لائبريري سرچ؛ MS: ماس اسپيڪٽرم تجزيو، اسپيڪٽرم لائبريري سرچ)

3. ٻيا اوزار ۽ طريقا

حصو
06 مقدار جي چوٽي مطابقت جي تصديق

ڪروميٽوگرافڪ چوٽي جي مطابقت جي تصديق ڪريو (پاڪ)

پڪ ڪريو ته هر ڪروميٽگرافڪ چوٽي جي هيٺان صرف هڪ ماپيل جزو آهي

تعاون ڪرڻ واري مواد جي مداخلت جي جانچ ڪريو (تغيرات)

Chromatographic Peak Consistency (Purity) جي تصديق جا طريقا

فوٽوڊيوڊ ميٽرڪس (PDA) ڊيڪٽرز سان اسپيڪٽروگرام جو مقابلو ڪرڻ

چوٽي جي صفائي جي سڃاڻپ

2996 Purity Angle Theory

مقداري طريقا عام طور تي حصو 07 ۾ استعمال ڪيا ويا

معياري وکر جو طريقو، ورهايل خارجي معياري طريقو ۽ اندروني معياري طريقو:

1. خارجي معياري طريقو: گهڻو ڪري مائع ڪروميٽوگرافي ۾ استعمال ٿيل

سڃاتل ڪنسنٽريشن جي معياري نموني جو هڪ سلسلو تيار ڪيو ويو ته مرکبات جا خالص نمونا استعمال ڪري معياري نموني طور جانچيا وڃن.ان جي جوابي قيمت تائين ڪالمن ۾ داخل ڪيو ويو (چوٽي واري علائقي).
هڪ خاص حد اندر، معياري نموني جي ڪنسنٽريشن ۽ جوابي قدر جي وچ ۾ سٺو لڪير وارو تعلق آهي، يعني W= f×A، ۽ هڪ معياري وکر ٺهيل آهي.

ساڳي ئي تجرباتي حالتن جي تحت، اڻڄاتل نموني کي ماپڻ لاء اجزاء جي جوابي قيمت حاصل ڪرڻ لاء.ڄاڻايل کوٽائي f جي مطابق، جزو جي ڪنسنٽريشن کي ماپي سگهجي ٿو.

ٻاهرين معياري طريقي جا فائدا:سادي آپريشن ۽ حساب ڪتاب، اهو عام طور تي استعمال ٿيل مقداري طريقو آهي؛ڪابه ضرورت ناهي ته هر جزو کي ڳولڻ ۽ ختم ڪرڻ لاء؛معياري نموني جي ضرورت آهي؛معياري نموني ۽ اڻڄاتل نموني جي ماپ جون حالتون برابر هجڻ گهرجن؛انجڻ جي مقدار درست هجڻ گهرجي.

خارجي معياري طريقي جا نقصان:تجرباتي حالتن کي اعلي هجڻ جي ضرورت آهي، جهڙوڪ ڊيڪٽر جي حساسيت، وهڪري جي شرح، ۽ موبائيل مرحلن جي جوڙجڪ کي تبديل نٿو ڪري سگهجي.هر انجيڪشن جي مقدار کي سٺو ريپٽيبلٽي هجڻ گهرجي.

2. اندروني معياري طريقو: صحيح، پر مشڪل، معياري طريقن ۾ سڀ کان وڌيڪ استعمال ٿيل

اندروني معيار جي ڄاڻايل مقدار کي معياري ۾ شامل ڪيو ويو آهي مخلوط معيار ٺاهڻ لاء، ۽ ڄاڻايل ڪنسنٽريشن جي ڪم ڪندڙ معيارن جو هڪ سلسلو تيار ڪيو ويو آهي.مخلوط معيار ۾ معياري ۽ اندروني معيار جو دالر تناسب اڻڄاتل رهي ٿو.ڪروميٽوگرافڪ ڪالم ۾ داخل ڪريو ۽ وٺو (معياري نموني چوٽي واري علائقي/اندروني معياري نموني چوٽي واري علائقي) جي جوابي قيمت جي طور تي.جوابي قدر ۽ ڪم ڪندڙ معيار جي ڪنسنٽريشن جي وچ ۾ لڪير لاڳاپن جي مطابق، يعني W = f × A، هڪ معياري وکر ٺاهيو ويندو آهي.

اڻڄاتل نموني ۾ اندروني معيار جي هڪ ڄاڻايل مقدار شامل ڪئي وئي آهي ۽ ڪالمن ۾ داخل ڪيو ويو آهي ماپ حاصل ڪرڻ لاء جزو جي جوابي قيمت حاصل ڪرڻ لاء.ڄاڻايل کوٽائي f جي مطابق، جزو جي ڪنسنٽريشن کي ماپي سگهجي ٿو.

اندروني معياري طريقي جون خاصيتون:آپريشن دوران، نموني ۽ اندروني معيار گڏجي گڏ ڪيا ويا آهن ۽ ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن ۾ داخل ڪيا ويا آهن، تنهنڪري جيستائين ماپيل جزو جي مقدار جو تناسب مخلوط حل ۾ اندروني معيار جي برابر آهي، نموني جي مقدار ۾ تبديلي. مقدار جي نتيجن کي متاثر نه ڪندو..اندروني معياري طريقو نموني جي مقدار جي اثر کي ختم ڪري ٿو، ۽ جيتوڻيڪ موبائل مرحلو ۽ ڊيڪٽر، تنهنڪري اهو ٻاهرين معياري طريقي کان وڌيڪ صحيح آهي.

حصو
08 عنصر جيڪي مقدار جي تجزيي جي نتيجن کي متاثر ڪن ٿا

خراب درستگي سبب ٿي سگھي ٿو:

غلط چوٽي واري علائقي جو انضمام، نموني جي ٺهڻ يا نموني جي تياري دوران متعارف ٿيل نجاست، نموني جي شيشي کي سيل نه ڪيو ويو، نموني يا سالوينٽ وولٽيلائيزيشن، غلط نموني تيار ڪرڻ، نموني انجيڪشن مسئلا، غلط اندروني معياري تياري

خراب درستي لاء ممڪن سبب:

غلط چوٽي انضمام، انجيڪشن يا انجيڪٽر مسئلا، نموني جي ٺهڻ يا نموني جي تياري دوران متعارف ٿيل نجاست، ڪروميٽوگرافڪ مسئلا، خراب ٿيل ڊيڪٽر جواب