هي آرٽيڪل توهان کي سيکاريندو آهي ته هڪ مائع ڪروميٽگرافي ڪالمن کي ڪيئن چونڊيو

مائع ڪروميٽوگرافي هر جزو جي مواد کي جانچڻ جو بنيادي طريقو آهي ۽ خام مال، وچولي، تياري ۽ پيڪنگنگ مواد ۾ نجاست، پر ڪيترن ئي مادو تي ڀروسو ڪرڻ لاءِ معياري طريقا نه آهن، تنهنڪري نوان طريقا تيار ڪرڻ ناگزير آهي. مائع مرحلن جي طريقن جي ترقي ۾، ڪروميٽوگرافڪ ڪالم مائع ڪروميٽوگرافي جو بنيادي حصو آھي، تنھنڪري ھڪڙي مناسب ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن کي ڪيئن چونڊيو اھم آھي. هن آرٽيڪل ۾، ليکڪ وضاحت ڪندو ته هڪ مائع ڪروميٽوگرافي ڪالمن کي ٽن حصن مان ڪيئن چونڊيو: مجموعي خيالات، غور ۽ ايپليڪيشن جو دائرو.

A. مائع ڪروميٽوگرافي ڪالمن کي چونڊڻ لاءِ مجموعي خيال

1. تجزيي جي جسماني ۽ ڪيميائي ملڪيتن جو جائزو وٺو: جيئن ته ڪيميائي ساخت، محلول، استحڪام (جيئن ته ڇا اهو آسان آهي آڪسائيڊائزڊ/گهٽائي/هائيڊولائيزڊ ٿيڻ)، تيزابيت ۽ الڪاليٽي وغيره، خاص طور تي ڪيميائي جوڙجڪ اهم آهي. خاصيتن کي طئي ڪرڻ ۾ عنصر، جيئن ته ٺهڪندڙ گروپ مضبوط الٽراوائلٽ جذب ۽ مضبوط فلوروسنس آهي؛

2. تجزيو جو مقصد طئي ڪريو: ڇا اعلي علحدگي، اعلي ڪالمن جي ڪارڪردگي، مختصر تجزيو وقت، اعلي حساسيت، اعلي دٻاء جي مزاحمت، ڊگهي ڪالمن جي زندگي، گھٽ قيمت، وغيره جي ضرورت آهي؛

1. هڪ مناسب ڪروميٽوگرافڪ ڪالم چونڊيو: ڪروميٽوگرافڪ فلر جي ساخت، جسماني ۽ ڪيميائي ملڪيتن کي سمجھو، جهڙوڪ ذري جي سائيز، سوراخ جي ماپ، درجه حرارت رواداري، پي ايڇ رواداري، تجزيي جي جذب، وغيره.

1. مائع ڪروماتوگرافي ڪالمن کي چونڊڻ لاءِ ويچار

هي باب انهن عنصرن تي بحث ڪندو جنهن تي غور ڪيو وڃي ٿو جڏهن ڪروميٽوگرافي ڪالمن کي چونڊيو وڃي ته ڪروميٽوگرافي ڪالمن جي جسماني ۽ ڪيميائي ملڪيتن جي نقطه نظر کان. 2.1 فلر ميٽرڪس

2.1.1 سليڪا جيل ميٽرڪس اڪثر مائع ڪروميٽوگرافي ڪالمن جو فلر ميٽرڪس سليڪا جيل آهي. هن قسم جي فلر ۾ اعلي پاڪائي، گهٽ قيمت، اعلي ميڪيڪل طاقت، ۽ گروپن کي تبديل ڪرڻ ۾ آسان آهي (جهڙوڪ فينائل بانڊنگ، امينو بانڊنگ، سائانو بانڊنگ، وغيره)، پر پي ايڇ جي قيمت ۽ درجه حرارت جي حد تائين محدود آهي: اڪثر سليڪا جيل ميٽرڪس فلرز جي پي ايڇ جي حد 2 کان 8 آهي، پر خاص طور تي تبديل ٿيل سليڪا جيل بانڊڊ مرحلن جي پي ايڇ جي حد 1.5 کان 10 تائين ويڪر ٿي سگهي ٿي، ۽ اتي پڻ خاص طور تي تبديل ٿيل سليڪا جيل بانڊڊ مرحلا آهن جيڪي گهٽ پي ايڇ تي مستحڪم آهن، جهڙوڪ Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18، جيڪو pH 1 کان 8 تي مستحڪم آهي؛ سليڪا جيل ميٽرڪس جي مٿئين درجه حرارت جي حد عام طور تي 60 ℃ آهي، ۽ ڪجهه ڪروماتگرافي ڪالمن کي اعلي پي ايڇ تي 40 ℃ جي درجه حرارت برداشت ڪري سگهي ٿي.

2.1.2 پوليمر ميٽرڪس پوليمر فلر اڪثر ڪري پولسٽريئرين-ڊيوينيلبينزين يا پوليميٿڪريليٽ آهن. انهن جا فائدا آهن ته اهي هڪ وسيع پي ايڇ جي حد کي برداشت ڪري سگهن ٿا - اهي 1 کان 14 جي حد تائين استعمال ڪري سگهجن ٿا، ۽ اهي وڌيڪ گرمي پد جي مزاحمتي آهن (80 ° C کان مٿي پهچي سگهن ٿيون). سليڪا تي ٻڌل C18 فلرز جي مقابلي ۾، هن قسم جي فلر کي مضبوط هائيڊروفوبيسيٽي آهي، ۽ ميڪروپورس پوليمر نموني کي الڳ ڪرڻ ۾ تمام مؤثر آهي جهڙوڪ پروٽين. ان جا نقصان هي آهن ته ڪالمن جي ڪارڪردگي گهٽ آهي ۽ ميڪانياتي طاقت سليڪا جي بنياد تي ڀرڻ وارن جي ڀيٽ ۾ ڪمزور آهي. 2.2 ذرات جي شڪل

گهڻا جديد HPLC ڀريندڙ گولا ذرات آهن، پر ڪڏهن ڪڏهن اهي غير منظم ذرات آهن. گول ذرات گهٽ ڪالمن جي دٻاء، اعلي ڪالمن جي ڪارڪردگي، استحڪام ۽ ڊگهي زندگي مهيا ڪري سگھن ٿا؛ جڏهن اعلي viscosity موبائيل مرحلن (جهڙوڪ فاسفورڪ ايسڊ) استعمال ڪندي يا جڏهن نموني جو حل چپس وارو هوندو آهي، غير منظم ذرات هڪ وڏو مخصوص مٿاڇري وارو علائقو آهي، جيڪو ٻن مرحلن جي مڪمل عمل لاء وڌيڪ سازگار آهي، ۽ قيمت نسبتا گهٽ آهي. 2.3 ذرات جي ماپ

ذري جي سائيز جيتري ننڍي هوندي، ڪالمن جي ڪارڪردگي جيتري وڌيڪ هوندي ۽ علحدگيءَ جي اوتري وڌيڪ هوندي، پر تيز دٻاءُ جي مزاحمت به وڌيڪ خراب هوندي. سڀ کان عام طور تي استعمال ٿيل ڪالمن 5 μm ذرو سائيز ڪالمن آهي؛ جيڪڏهن علحدگي جي گهرج وڌيڪ آهي، هڪ 1.5-3 μm ڀريندڙ چونڊيو وڃي ٿو، جيڪو ڪجهه پيچيده ميٽرڪس ۽ گهڻن اجزاء جي نموني جي الڳ ٿيڻ واري مسئلي کي حل ڪرڻ لاء سازگار آهي. UPLC استعمال ڪري سگھي ٿو 1.5 μm ڀريندڙ؛ 10 μm يا وڏو ذرو سائيز ڀريندڙ اڪثر ڪري استعمال ڪيا ويندا آهن نيم تياري يا تياري واري ڪالمن لاءِ. 2.4 ڪاربان مواد

ڪاربن جو مواد سليڪا جيل جي مٿاڇري تي بند ٿيل مرحلي جي تناسب ڏانهن اشارو ڪري ٿو، جيڪو مخصوص سطح جي ايراضيء سان لاڳاپيل آهي ۽ بند ٿيل مرحلو ڪوريج. هاء ڪاربان مواد اعلي ڪالمن جي گنجائش ۽ اعلي ريزوليوشن مهيا ڪري ٿي، ۽ اڪثر ڪري پيچيده نمونن لاء استعمال ڪيو ويندو آهي جنهن کي اعلي علحدگيء جي ضرورت هوندي آهي، پر ٻن مرحلن جي وچ ۾ ڊگهي رابطي واري وقت جي ڪري، تجزيو جو وقت ڊگهو آهي؛ گھٽ ڪاربان مواد ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن ۾ مختصر تجزيو وقت ھوندو آھي ۽ مختلف چونڊون ڏيکاري سگھن ٿا، ۽ اڪثر استعمال ڪيا ويندا آھن سادو نمونن لاءِ جن کي تيز تجزيو ۽ نمونن جي ضرورت ھوندي آھي جن کي تيز آبي مرحلن جي حالتن جي ضرورت ھوندي آھي. عام طور تي، C18 جو ڪاربان مواد 7٪ کان 19٪ تائين آهي. 2.5 پور جي ماپ ۽ مخصوص سطح جي ايراضي

HPLC adsorption media porous particles آهن، ۽ تمام گهڻيون ڳالهيون سوراخن ۾ ٿينديون آهن. تنهن ڪري، انوولز کي جذب ڪرڻ ۽ الڳ ٿيڻ لاء سوراخ ۾ داخل ٿيڻ گهرجي.

پور جي ماپ ۽ مخصوص مٿاڇري واري ايراضي ٻه مڪمل مفهوم آهن. ننڍي سوراخ جي ماپ جو مطلب آهي وڏي مخصوص سطح جي ايراضي، ۽ ان جي برعڪس. هڪ وڏو مخصوص مٿاڇري وارو علائقو نمونن جي ماليڪيولز ۽ بند ٿيل مرحلن جي وچ ۾ رابطي کي وڌائي سگھي ٿو، برقرار رکڻ کي وڌايو، نموني لوڊ ڪرڻ ۽ ڪالمن جي گنجائش وڌائي، ۽ پيچيده اجزاء جي الڳ ٿيڻ. مڪمل طور تي سوراخ ڀريندڙ هن قسم جي فلرز سان تعلق رکن ٿا. انهن لاءِ جيڪي اعليٰ علحدگيءَ جي گهرج سان گڏ آهن، اها سفارش ڪئي وئي آهي ته فلر کي وڏي مخصوص مٿاڇري واري علائقي سان چونڊيو وڃي. ننڍي مخصوص مٿاڇري واري ايراضي پوئتي دٻاء کي گھٽائي سگھي ٿي، ڪالمن جي ڪارڪردگي کي بهتر بڻائي، ۽ توازن واري وقت کي گھٽائي سگھي ٿو، جيڪو تدريسي تجزيو لاء مناسب آھي. ڪور-شيل ڀرڻ وارا هن قسم جي فلرز سان تعلق رکن ٿا. علحدگيءَ کي يقيني بڻائڻ جي بنياد تي، اها سفارش ڪئي وئي آهي ته فلر چونڊڻ لاءِ ننڍڙن مخصوص مٿاڇري واري علائقي سان انهن لاءِ جيڪي اعليٰ تجزيي جي ڪارڪردگيءَ جي گهرج سان. 2.6 پور حجم ۽ مشيني طاقت

Pore ​​Volume، جنهن کي ” pore Volume“ به چيو ويندو آهي، اهو اشارو ڪري ٿو وائڊ حجم في يونٽ پارٽيڪل جي ماپ. اهو فلر جي مشيني طاقت کي چڱي طرح ظاهر ڪري سگهي ٿو. فلرز جي ميخانياتي طاقت وڏي سوراخ واري مقدار سان ٿوري ڪمزور هوندي آهي فلرز جي ڀيٽ ۾ ننڍي پور حجم سان. 1.5 mL/g کان گهٽ يا ان جي برابر پور جي مقدار سان فلر اڪثر ڪري HPLC علحدگيءَ لاءِ استعمال ٿيندا آهن، جڏهن ته 1.5 mL/g کان وڌيڪ pore حجم وارا فلر خاص طور تي ماليڪيولر خارج ڪرڻ واري ڪروميٽوگرافي ۽ گھٽ پريشر ڪروميٽوگرافي لاءِ استعمال ٿيندا آهن. 2.7 ڪيپنگ جي شرح

ڪيپنگ مرڪب ۽ بي نقاب ٿيل سلانول گروپن جي وچ ۾ رابطي جي ڪري ٽائلنگ جي چوٽي کي گھٽائي سگھي ٿي (جهڙوڪ الڪائن مرڪب ۽ سلانول گروپن جي وچ ۾ آئنڪ بانڊنگ، وان ڊير والز فورسز ۽ تيزابي مرکبات ۽ سلانول گروپن جي وچ ۾ هائڊروجن بانڊ)، ان ڪري ڪالمن جي ڪارڪردگي ۽ چوٽي جي شڪل کي بهتر بڻائي ٿو. . اڻڄاتل بند ٿيل مرحلا ڪيپ ٿيل بند ٿيل مرحلن جي نسبت مختلف چونڊون پيدا ڪندا، خاص طور تي پولر نمونن لاءِ.

1. مختلف مائع ڪروميٽوگرافي ڪالمن جي ايپليڪيشن جو دائرو

هي باب ڪجهه ڪيسن ذريعي مختلف قسم جي مائع ڪروميٽوگرافي ڪالمن جي ايپليڪيشن اسڪوپ کي بيان ڪندو.

3.1 ريورسڊ فيز C18 ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن

C18 ڪالم سڀ کان عام استعمال ٿيل ريورسڊ فيز ڪالم آهي، جيڪو اڪثر نامياتي مواد جي مواد ۽ ناپاڪيءَ جي جاچ کي پورو ڪري سگهي ٿو، ۽ وچولي-پولر، ڪمزور طور تي پولر ۽ غير پولر مادي تي لاڳو ٿئي ٿو. C18 ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن جي قسم ۽ وضاحت کي مخصوص الڳ ڪرڻ جي ضرورتن مطابق چونڊيو وڃي. مثال طور، شين لاء اعلي علحدگيء جي گهرج سان، 5 μm * 4.6 mm * 250 mm specifications اڪثر استعمال ٿيندا آهن؛ ڪمپليڪس علحدگيءَ جي ماپن ۽ ساڳي قطبيت وارن شين لاءِ، 4 μm*4.6 mm*250 mm وضاحتون يا ننڍيون ننڍيون ذريون سائيزون استعمال ڪري سگھجن ٿيون. مثال طور، ليکڪ استعمال ڪيو 3 μm * 4.6 mm * 250 mm ڪالم celecoxib API ۾ ٻن جينوٽڪسڪ تڪليف کي ڳولڻ لاء. ٻن مادي جي جدائي 2.9 تائين پهچي سگھي ٿو، جيڪو شاندار آهي. ان کان علاوه، علحدگيء کي يقيني بڻائڻ جي بنياد تي، جيڪڏهن تيز تجزيي جي ضرورت آهي، 10 ملي يا 15 ملي ميٽر جي مختصر ڪالمن کي اڪثر چونڊيو ويندو آهي. مثال طور، جڏهن ليکڪ LC-MS/MS استعمال ڪيو پائپراڪائن فاسفٽ API ۾ جينوٽڪسڪ ناپاڪيءَ کي ڳولڻ لاءِ، هڪ 3 μm*2.1 mm*100 mm ڪالم استعمال ڪيو ويو. نجاست ۽ مکيه جزو جي وچ ۾ علحدگي 2.0 هئي، ۽ نموني جي سڃاڻپ 5 منٽن ۾ مڪمل ٿي سگهي ٿي. 3.2 ريورس ٿيل فينيل ڪالمن

فينيل ڪالم پڻ هڪ قسم جي رد ٿيل-مرحلي ڪالم آهي. هن قسم جي ڪالمن ۾ خوشبودار مرکبات لاءِ مضبوط چونڊ آهي. جيڪڏهن عام C18 ڪالمن پاران ماپيل خوشبودار مرڪب جو جواب ڪمزور آهي، توهان فينائل ڪالمن کي تبديل ڪرڻ تي غور ڪري سگهو ٿا. مثال طور، جڏهن مان celecoxib API ٺاهي رهيو هئس، ساڳئي ڪارخاني جي فينائل ڪالمن مان ماپيل مکيه جز جو جواب ۽ ساڳي وضاحت (سڀ 5 μm*4.6 mm*250 mm) C18 ڪالمن کان اٽڪل 7 ڀيرا هو. 3.3 نارمل فيز ڪالم

ريورسڊ فيز ڪالمن لاءِ هڪ مؤثر اضافي طور، نارمل فيز ڪالم انتهائي پولر مرڪب لاءِ موزون آهي. جيڪڏهن چوٽي اڃا تمام تيز آهي جڏهن 90٪ کان وڌيڪ آبي مرحلي سان ريورس ٿيل-فيز ڪالمن ۾ ايليويو وڃي ٿي، ۽ ايستائين جو سولوينٽ چوٽي جي ويجهو ۽ اوورليپ ٿئي ٿي، توهان عام-مرحلي ڪالمن کي تبديل ڪرڻ تي غور ڪري سگهو ٿا. هن قسم جي ڪالمن ۾ هيلڪ ڪالم، امينو ڪالمن، سائانو ڪالمن وغيره شامل آهن.

3.3.1 Hilic column Hilic column عام طور تي هائيڊروفيلڪ گروپن کي بند ٿيل الڪائل زنجير ۾ شامل ڪري ٿو ته جيئن قطبي شين جي ردعمل کي وڌايو وڃي. هن قسم جي ڪالمن کي کنڊ جي مواد جي تجزيي لاء مناسب آهي. ليکڪ هن قسم جي ڪالمن کي استعمال ڪيو آهي جڏهن مواد ۽ لاڳاپيل شيون xylose ۽ ان مان نڪتل شيون. هڪ xylose نڪتل جي isomers به ​​چڱي طرح جدا ڪري سگهجي ٿو.

3.3.2 امينو ڪالمن ۽ سائانو ڪالمن امينو ڪالمن ۽ سائانو ڪالمن جو حوالو ڏنو ويو آهي امينو ۽ سائانو تبديلين جي تعارف کي بند ٿيل الڪائل چين جي آخر ۾، ترتيب سان، خاص مواد جي چونڊ کي بهتر ڪرڻ لاء: مثال طور، امينو ڪالمن هڪ سٺو انتخاب آهي. شگر جي علحدگيءَ لاءِ، امينو اسيد، بيسز ۽ امائيڊس؛ cyano ڪالمن کي بهتر سليڪٽيوٽي آهي جڏهن هائيڊروجنيٽيڊ ۽ غير هائيڊروجنيٽيڊ ڍانچي جي هڪجهڙائي واري مواد کي الڳ ڪرڻ جي ڪري ڪنجوگيٽڊ بانڊز جي موجودگي جي ڪري. امينو ڪالمن ۽ سائانو ڪالم اڪثر ڪري عام مرحلي جي ڪالمن ۽ ريورس فيز ڪالمن جي وچ ۾ تبديل ٿي سگھن ٿا، پر بار بار سوئچنگ جي سفارش نه ڪئي وئي آهي. 3.4 چيرل ڪالم

چيرل ڪالم، جيئن نالو مشورو ڏئي ٿو، خاص طور تي دواسازي جي شعبي ۾، chiral مرکبات جي جداگي ۽ تجزيو لاء مناسب آهي. هن قسم جي ڪالمن کي سمجهي سگهجي ٿو جڏهن روايتي ريورس مرحلو ۽ عام مرحلو ڪالمن isomers جي علحدگي حاصل نٿا ڪري سگهن. مثال طور، ليکڪ استعمال ڪيو 5 μm * 4.6 mm * 250 mm چيرل ڪالمن کي الڳ ڪرڻ لاءِ 1,2-diphenylethylenediamine جي ٻن isomers: (1S, 2S)-1, 2-diphenylethylenediamine ۽ (1R, 2R)-1, 2. -diphenylethylenediamine، ۽ ٻنهي جي وچ ۾ علحدگي اٽڪل 2.0 تائين پهچي وئي. بهرحال، چيرل ڪالمن ٻين قسمن جي ڪالمن کان وڌيڪ قيمتي هوندا آهن، عام طور تي 1W +/piece. جيڪڏهن اهڙي ڪالمن جي ضرورت آهي، يونٽ کي ڪافي بجيٽ ٺاهڻ جي ضرورت آهي. 3.5 آئن ايڪسچينج ڪالم

آئن ايڪسچينج ڪالمن چارج ٿيل آئنز جي علحدگيءَ ۽ تجزيي لاءِ موزون آهن، جهڙوڪ آئنز، پروٽين، نيوڪليڪ اسيد، ۽ ڪجهه کنڊ جا مادا. فلر جي قسم جي مطابق، اهي ورهايل آهن ڪيشن ايڪسچينج ڪالمن، آئن ايڪسچينج ڪالمن، ۽ مضبوط ڪيشن ايڪسچينج ڪالمن.

ڪيشن مٽائڻ واري ڪالمن ۾ ڪلسيم تي ٻڌل ۽ هائڊروجن تي ٻڌل ڪالمن شامل آهن، جيڪي بنيادي طور تي ڪيشنڪ مادو جهڙوڪ امينو اسيد جي تجزيو لاء مناسب آهن. مثال طور، ليکڪ calcium-based ڪالمن استعمال ڪيو جڏهن calcium gluconate ۽ calcium acetate جو تجزيو ڪندي فلشنگ حل ۾. ٻنهي مادو λ = 210nm تي مضبوط ردعمل هئا، ۽ علحدگيء جي درجي تائين پهچي وئي 3.0؛ ليکڪ هائيڊروجن تي ٻڌل ڪالمن استعمال ڪيو جڏهن گلوڪوز سان لاڳاپيل مواد جو تجزيو ڪيو. ڪيترائي اهم لاڳاپيل مادا - مالٽوز، مالٽوٽريز ۽ فرڪٽوز - ڊفرنشل ڊيڪٽرز جي تحت اعليٰ حساسيت رکندڙ هئا، جن جي سڃاڻپ جي حد گهٽ ۾ گهٽ 0.5 پي پي ايم ۽ 2.0-2.5 جي علحدگيءَ جي حد سان.

Anion مٽائي ڪالمن بنيادي طور anionic مادي جي تجزيي لاء مناسب آهن جيئن ته نامياتي تيزاب ۽ halogen ions؛ مضبوط ڪيشن ايڪسچينج ڪالمن ۾ اعلي آئن جي مٽاسٽا جي گنجائش ۽ چونڊ آهي، ۽ پيچيده نموني جي جداگي ۽ تجزيو لاء مناسب آهن.

مٿي ڏنل صرف هڪ تعارف آهي قسمين ۽ ايپليڪيشن جي حدن جي ڪيترن ئي عام مائع ڪروميٽوگرافي ڪالمن جي ليکڪ جي پنهنجي تجربي سان گڏ. اصل ايپليڪيشنن ۾ ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن جا ٻيا خاص قسم آهن، جهڙوڪ وڏا-پوري ڪروميٽوگرافڪ ڪالم، ننڍا-پوري ڪروميٽوگرافڪ ڪالم، لاڳاپا ڪروميٽوگرافڪ ڪالم، ملٽي موڊ ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن، الٽرا هاءِ پرفارمنس مائع ڪروميٽوگرافڪ (سپر ڪروميٽوگرافڪ ڪولميٽوگرافڪ) SFC) وغيره مختلف شعبن ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿا. ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن جي مخصوص قسم کي نموني جي ساخت ۽ ملڪيت، الڳ ڪرڻ جي ضرورتن ۽ ٻين مقصدن جي مطابق چونڊيو وڃي.